生物顯微鏡-顯微鏡技術原理詳解
微生物個體微小，用肉眼直接觀顯微鏡察不到，必須借助才能觀察到他的個體形態和細胞結構。在蛋白質結構等所需對物質的微觀結構進行觀察的研究中也都會用到各種顯微鏡。現有的各種顯微鏡基本上都是由物鏡和目鏡組成，目鏡的焦距很短，目鏡的焦距很長，目鏡的作用是得到物體放大的實像，目鏡的作用是將物鏡放大的實像作爲物體，進一步放大成虛像。顯微鏡將物體放大的總倍數是物鏡放大倍數乘以目鏡放大的倍數。
熒光顯微鏡的基本原理
熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統和光學系統等主要部件組成。是利用一定波長的光激發標本發射熒光，通過物鏡和目鏡系統放大以觀察標本的熒光。
(一)光源
現在多采用200W的超高壓汞燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內充一定數量的汞，工作時由兩個電極間放電，引起水銀蒸發，球內氣壓迅速升高，當水銀完全蒸發時，可達50∼70個標准大氣壓力，這一過程一般約需5∼15min。超高壓汞燈的發光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫外和藍紫光，足以激發各類熒光物質，因此，爲熒光顯微鏡普遍采用。
超高壓汞燈也散發大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環境溫度不宜太高。
新型超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃，使用一些時間後，則需要高壓啓動(約爲15000V)，啓動後，維持工作電壓一般爲50∼60V，工作電流約4A左右。200W超高壓汞燈的平均壽命，在每次使用2h的情況下約爲200h，開動一次工作時間愈短，則壽命愈短，如開一次只工作20min，則壽命降低50%。因此，使用時盡量減少啓動次數。燈泡在使用過程中，其光效是逐漸降低的。燈熄滅後要等待冷卻才能重新啓動。點燃燈泡後不可立即關閉，以免水銀蒸發不完全而損壞電極，一般需要等15min。由于超高壓汞燈壓力很高，紫外線強烈，因此燈泡必須置燈室中方可點燃，以免傷害眼睛和發生爆炸時造成操作。
超高壓汞燈(100W或200W)光源的電路和包括變壓、鎮流、啓動幾個部分。在燈室上有調節燈泡發光中心的系統，燈泡球部後面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡，前面安裝有集光透鏡。
國産超高壓汞燈GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的進口燈泡，平均壽命在200h以上，價格也比較低。
我國研制的一種簡易輕便型高色溫溴鎢熒光光源裝置，體積小，重量輕，功率小，交、直流兩用(自帶直流電源)，易于攜帶，使用方便，已推廣應用。
(二)濾色系統
濾色系統是熒光顯微鏡的重要部位，由激發濾板和壓制濾板組成。濾板型號，各廠家名稱常不統一。濾板一般都以基本色調命名，前面字母代表色調，後面字母代表玻璃，數字代表型號特點。如德國産品(Schott)BG12，就是種藍色玻璃，B是藍色的第一個字母，G是玻璃的第一個字母；我國産品的名稱已統一用拼音字母表示，如相當于BG12的藍色濾板名爲QB24，Q是青色(藍色)拼音的第一個字母，B是玻璃拼音的第一個字母。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名，如K530，就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光。還有的廠家的濾板完全以數字命名，如美國Corning廠的NO：5-58，即相當于BG12。
1．激發濾板根據光源和熒光色素的特點，可選用以下三類激發濾板，提供一定波長範圍的激發光。
紫外光激發濾板：此濾板可使400nm以下的紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過。常用型號爲UG-1或UG-5，外加一塊BG-38，以除去紅色尾波。
紫外生物顯微鏡藍光激發濾板：此濾板可使300∼450nm範圍內的光通過。常用型號爲ZB-2或ZB-3，外加BG-38。
紫藍光激發濾板：它可使350∼490nm的光通過。常用型號爲QB24(BG12)。
最大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達明色素)可用藍綠濾板(如B-7)激發。
近年開始采用金屬膜幹涉濾板，由于針對性強，波長適當，因而激發效果比較玻璃濾更好。如西德Leitz廠的FITC專用KP490濾板和羅達明的S546綠色濾板，均遠比玻璃濾板效果好。
激發濾板分薄厚兩種，一般暗視野選用薄濾板，亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些。基本要求是以獲得最明亮的熒光和最好的背景爲准。
2．壓制濾板壓制濾板的作用是完全阻擋激發光通過，提供相應濾長範圍的熒光。與激發濾板相對應，常用以下3種壓制濾板：
紫外光壓制濾板：可通過可見光、阻擋紫外光通過。能與UG-1或UG-5組合。常用GG-3K430或GG-6K460。
紫藍光壓制濾板：能通過510nm以上濾長的熒光(綠到紅)，能與BG-12組合。通常用OG-4K510或OG-1K530。
紫外紫光壓制濾板：能通過460nm以上波長的熒光(藍到紅)，可與BG-3組合，常用OG-11K470AK490，K510。
(三)反光鏡
反光鏡的反光層一般是鍍鋁的，因爲鋁對紫外光和可見光的藍紫區吸收少，反射達90%以上，而銀的反射只有70%；一般使用平面反光鏡。
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