1、每種熒光染料，均有自己的最適PH值，此時金相顯微鏡熒光最強。當pH改變時，不僅熒光強度減弱，而且波顯微鏡長將有所改變，因此熒光檢測時要在一定的P放大鏡H值望遠鏡的緩衝液中進行。
2、熒光染色在20℃以下時熒光比較穩定，溫度升高常出現溫度猝滅。
3、在熒光觀察中，常因激發光的增強而使樣品熒光很快衰竭，造成觀察和照相困難。為此最好用能量小的長波長光進行觀察，需照天文望遠鏡相時再適當增強激發光。
4、一般熒光染液的濃度在萬分之一以下，甚至億萬分之一，也能使標本著色。在一定的限度內，熒光強度可隨熒光素的濃度增加而增強，但超過限度，熒光強度反而下降，這是由於熒光分子間的締合而使自身熒光猝滅所致。
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