一.明視野觀察
明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢天文望遠鏡方式,廣泛應用於病理顯微鏡、檢驗,放大鏡用於觀察被染色的切片,所有顯微鏡均能完成此功能。
二.暗視野觀察
暗視野實際是暗場照明發。它的特點和明視野不同,不直接觀察到照明的光線,而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,視場成為黑暗的背景,而被檢物體則呈現明亮的像。
暗視野的原理是根據光學上的丁道爾現像,望遠鏡微塵在強光直射通過的情況下,人眼不能觀察,這是因為強光繞射造成的。若把光線斜射它,由於光的反射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見。
暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體,而是將光線改變途徑,使其斜射向被檢物體,使照明光線不直接進入物鏡,利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖像。暗視野觀察的分辨率遠高於明視野觀察,最高達0。02—0。004
三.相差鏡檢法
在光學顯微鏡的發展過程中,相差鏡檢術的發明成功,是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道,人眼只能區分光波的波長(顏色)和振幅(亮度),對於無色通明的生物標本,當光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標本。
相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現像,將人眼不可分辨的相位差變為可分辨的振幅差,即使是無色透明的物質也可成為清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察,因此相差鏡檢法廣泛應用於倒置顯微鏡。 )
相差顯微鏡的基本原理是,把透過標本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結構間的對比度,使各種結構變得清晰可見。光線透過標本後發生折射,偏離了原來的光路,同時被延遲了1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變為1/2λ,兩束光合軸後干涉加強,振幅增大或減下,提高反差。在構造上,相差顯微鏡有不同於普通光學顯微鏡兩個特殊之處:
1。 環形光闌 位於光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標本上。
2。 相位板 在物鏡中加了塗有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
1。 A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸後光波相加,振幅加大,標本結金相顯微鏡構比周圍介質更加變亮,形成亮反差(或稱負反差)。
2。 B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸後光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結構比周圍介質更加變暗。
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